超微量分光光度计应用于生命科学的具体领域分析

　　超微量分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器，主要设计用于生命科学实验室蛋白质组学和基因组学下述应用领域：

　　

　　一、核酸的定量

　　

　　核酸的定量是超微量分光光度计使用频率高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。

　　

　　定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。

　　

　　测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。

　　

　　二、蛋白质的直接定量（UV法）

　　

　　这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，超微量分光光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。

　　

　　蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，线性范围在1.0-1.5之间。

　　

　　三、比色法蛋白质定量

　　

　　蛋白质通常是多种蛋白质的化合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。

　　

　　四、细菌细胞密度

　　

　　实验室确定细菌生长密度和生长期，多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验，需要采用超微量分光光度计准确测定细菌细胞密度。细菌细胞密度是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。