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超微量分光光度计应用于生命科学的具体领域分析

发布时间: 2021-12-21  点击次数: 281次
  超微量分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器,主要设计用于生命科学实验室蛋白质组学和基因组学下述应用领域:
  
  一、核酸的定量
  
  核酸的定量是超微量分光光度计使用频率高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链、双链DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。
  
  定量不同类型的核酸,事先要选择对应的系数。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。
  
  测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。测试前,选择正确的程序,输入原液和稀释液的体积,尔后测试空白液和样品液。然而,实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者头痛的问题。灵敏度越高的仪器,表现出的吸光值漂移越大。
  
  二、蛋白质的直接定量(UV法)
  
  这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,超微量分光光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。
  
  蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm的“背景”信息,设定此功能“开”。与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,线性范围在1.0-1.5之间。
  
  三、比色法蛋白质定量
  
  蛋白质通常是多种蛋白质的化合物,比色法测定的基础是蛋白质构成成分:氨基酸(如酪氨酸,丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应,产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关,从而反应蛋白质浓度。
  
  四、细菌细胞密度
  
  实验室确定细菌生长密度和生长期,多根据经验和目测推断细菌的生长密度。在遇到要求较高的实验,需要采用超微量分光光度计准确测定细菌细胞密度。细菌细胞密度是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法。
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