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酵母互补实验的快速检测方法

发布时间: 2021-10-21  点击次数: 89次

 酵母,一种体内模式生物,具有很大的优势。酿酒酵母,芽殖酵母,是一种单细胞真核生物。大多数进程,例如转录,翻译,蛋白质折叠都是保守的,因此酵母是一种非常合适的复杂哺乳动物细胞的替代品。

 

与其他模式生物不同,例如大肠杆菌,酵母没有毒性,而且能表达完整的膜蛋白。

 

1996年对酵母基因组进行测序后,出现了许多用于基因操作的工具。发明了例如穿梭载体,通过同源重组删除基因。可以使用具有缺失菌株的大型文库,轻松设置功能分析。

 

酵母互补试验,缺失某种蛋白质的酵母突变体,通过转基因将一个外显子基因质粒转入突变体。此时,这株酵母突变体面对一种境况,就是这种缺失掉的蛋白质功能会影响它的存活和生长。如果这种缺失型突变体生长出来了,就意味着这种转入的外显子基因补偿了这种缺失基因的功能,使得酵母细胞能够正常存活和生长。有一些方法可以检测酵母的互补试验,比如液体测量,尿素测量法,氨测量法,水份测量法等。在此,我们介绍一种方法:计数酵母的方法。

 

CellDrop 明场计数酵母细胞:采用特有的小细胞模式,结合AI算法,准确计算酵母细胞总数

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不仅如此,采用荧光染料FDA+PI的组合,可以进行酵母细胞的活力检测

 活性检测:

     活性检测即用两种不同的荧光试剂进行染色。Y20.1细胞,过夜诱导,在明场计数仪下计数5e6 cells/ml. 针对CellDrop 酵母活性分析(DeNovix18ul的细胞悬浮液和1ulFDAPI。混合物避光下15min10ul的混合物侧面peptide入到celldrop中,进入yeast app进行测量。

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   活力检测中,应用荧光试剂判断酵母细胞的死活,将检测时间从5天的尿素检测或氨检测时间缩短到了十几秒。

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    无需一次性或可重复利用的计数板,CellDrop BF/FL做到绝对的无耗材,是新一代计数仪的代表。


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