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超微量分光光度计 | DS-11与核酸定量

发布时间: 2021-10-21  点击次数: 131次
核酸定量

核酸(nucleic acid)是含有磷酸基团的重要生物大分子,包括核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。因最初从细胞核分离获得,又具有酸性,故称为核酸。但凡有生命的地方就有核酸存在,即使是比细菌还小的病毒也含有核酸。核酸是生物遗传信息的载体,是构成基因和表达的物质基础,是合成蛋白质、组成细胞的重要生理活性物质,支配着生命从诞生到死亡的全过程。



核酸不仅与正常生命活动如生长繁殖、遗传变异、细胞分化等有密切关系,而且与生命的异常活动如肿瘤发生、辐射损伤、遗传病、代谢病、病毒感染等也息息相关。因此核酸研究是现代生物化学、生物分子学与医药学发展的重要领域,随着分子生物学的广泛应用,核酸定量已经成为一种常规化的实验手段。


核酸定量,包括双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA) 和 RNA 定量,是生命科学研究中的主要过程,需要在后续实验之前了解样品浓度。准确定量核酸浓度对于下一代测序、转染、PCR 和克隆等下游实验至关重要。这些实验通常需要特定范围的核酸浓度和纯度以获得最佳结果,而浓度的不准确测定会导致较大偏大结果或者测定失败。


    

DeNovix超微量光度计


Denovix,这一创造无耗材细胞计数神话的伟大pin pai,也曾创造了智能超微量光度计,于2013年,在美国市场正式发布销售智能型DS-11/11+超微量紫外可见分光光度计,其采用多点斜率技术,自动感应样品浓度并自动选择最佳检测光程技术,成功将超微量带入智能时代。从获得SelectScience质量的久负盛名的白金印章,到全球用户的评价高分,是全球科学家对DS-11产品易用性,服务和价值的充分信任。

作为一款灵敏的智能超微量光度计,DS-11采用SmartPath技术(US9442009B2),可自动感应样品浓度并调节至最佳检测光程,对于各种浓度的样品都具备最高的检测灵敏度和可靠性,斜率算法确保仪器终生精度,无需校准,堪称最新一代智能超微量光度计的典范。



文献分享



Pan等[1]在探究lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1通过激活Wnt/β-catenin信号调控肺癌的肿瘤发生和转移这一过程中即需要进行定量RNA以便量化PCR。该研究成果最终发表在杂志MOLCULAR CANCER上,题目为“lncRNA JPX/miR-33a-5p/Twist1 axis regulates tumorigenesis and metastasis of lung cancer by activating Wnt/β-catenin signaling"(2020 Jan 15;19(1):9. doi: 10.1186/s12943-020-1133-9. IF=27.404)

摘要:
背景:MicroRNAs (miRNAs) 和 Twist1 诱导的上皮间质转化 (EMT) 可促进癌细胞传播这点已经得到很好的证实,但长链非编码 RNA (lncRNAs) 在 Twist1 介导的信号传导中的作用尚未可知。

方法:通过RT-qPCR和蛋白质印迹检测肺癌细胞系和组织中lncRNA JPX和Twist1的表达水平。通过蛋白质印迹、挽救实验、集落形成试验、流式细胞术和异种移植动物实验,研究了 JPX 对肺癌细胞中 Twist1 表达、细胞生长、侵袭、凋亡和体内肿瘤生长的影响。

结果:我们观察到 lncRNA JPX 在肺癌转移组织中上调,并且与肿瘤大小和晚期密切相关。在功能上,JPX 在体外促进肺癌细胞增殖并在体内促进肺肿瘤生长。此外,JPX 通过竞争性海绵 miR-33a-5p 上调 Twist1,随后诱导 EMT 和肺癌细胞侵袭。有趣的是,JPX 和 Twist1 在肺癌组织和细胞中协同上调。在机制上,JPX/miR-33a-5p/Twist1通过激活 Wnt/β-catenin 信号参与 EMT 进程。

结论:这些发现表明 lncRNA JPX 是 Twist1 信号传导的介质,可使肺癌细胞易于转移,并可能作为靶向治疗的潜在靶点。

作者从肺组织和细胞中分离得到总RNA,用DeNovix DS-11 分光光度计检测 RNA 的纯度和浓度,以进行后续的量化PCR。DeNovix DS-11可检测到的RNA的下限低至0.60 ng/uL RNA。该设备能检测RNA浓度的同时也能给出 260/280 和 260/230 比率,直接判断RNA的纯度,若样品不纯会直接给出警告指示。


Tips:A260nm是核酸最高吸收峰的波长,A280是蛋白质和酚类物质最高吸收峰的吸收波长,纯DNA的A260/A280=1.8,纯RNA的A260/A280=2.0,若<1.8或2.0,则表示样品受到蛋白质(芳香族)或酚类物质的污染,需纯化样品。

除了RNA,DS-11还能检测DNA和蛋白质等,检测下限0.75 ng/uL dsDNA和0.04 mg/mL BSA,上限为37500 ng/uL dsDNA 或 1125 mg/ml BSA 蛋白。紫外-可见分光光度法和荧光法是核酸定量的常用方法,两者可视为对比且互补的样品定量方法。

DeNovix超微量光度计结合吸光度和荧光检测与一身,具备优秀的精确度、灵敏度、特异性和易用性,小巧轻便,方便移动、户外研究作业。并且拥有多个型号,不同型号拥有不同配置,适用于超广研究方向和使用者群体。


Denovix超微量主要特点>>


1、主机超微量模式始终如一的精度、终身免校。zhuan li的SmartPath和Bridge testing技术保驾护航。
2、无论是微量模式还是紫外荧光一体式:测量样品的浓度范围最宽,上下限均是行业内的翘首。
3、根据样品浓度不同,自动变换测量光程。受zhuan li保护(US9442009B2)。超微量模式:0.02mm自动变换至0.5mm。
4、污染物分析功能SmartQC,污染物种类鉴定报告。提示污染物,结合荧光模块检测。
5、微量模式下,蛋白质浓度无限制准确测量。无需稀释至比色皿,微量即可检测高浓度的蛋白质。
6、wei一一款整合了荧光光度计的超微量,非常适用于疫苗生产企业的残留检测。



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