荧光定量PCR(qPCR)是一种常用于基因表达、病原体检测和基因分型的高灵敏度技术。但如果荧光定量PCR校准不到位，结果可能出现偏差，甚至得出错误结论。所谓“校准”，就是让仪器和实验条件保持一致，使不同时间、不同批次的检测数据可比、可靠。下面给新手介绍一个简单、可操作的校准流程，一看就懂。 第一步：准备标准品与校准材料
校准需要一个已知浓度的标准品，比如含有特定DNA片段的质粒或合成的寡核苷酸，浓度经过精确标定。还要准备与日常实验相同的反应体系、引物和探针，以及稳定的荧光定量PCR仪。很多实验室会用商业的“校准试剂盒”，里面已配好标准品和操作说明，新手可直接选用。
第二步：检查仪器状态
在正式校准前，先确认PCR仪的温度准确性和光学检测正常。可运行仪器自带的自检程序，检查加热模块温差是否在允许范围(一般±0.5℃内)，荧光通道信号是否均衡。若近期搬动或长时间未用，建议先做温控校准。
第三步：建立标准曲线
将标准品按倍比稀释成至少5个不同浓度(如10⁶、10⁵、10⁴、10³、10²拷贝/μL)，依次加入反应板，按平常实验的程序运行qPCR。记录每个浓度的循环阈值(Ct值)，用对数浓度与Ct值绘制标准曲线。理想情况下，曲线斜率应在-3.1~-3.6之间，相关系数(R²)≥0.99，说明扩增效率接近100%。如果偏离太多，要检查试剂、反应条件或重新校准仪器。
第四步：验证与调整
用一份已知浓度的验证样本(不在标准曲线点内)进行测试，看测得的浓度是否与预期相符。误差较大时，可微调引物浓度、退火温度或更换荧光染料通道，再次跑标准曲线。
第五步：记录与定期复校
把校准日期、标准品信息、曲线数据和仪器状态记在实验记录本或电子系统中。建议每3–6个月或在更换关键试剂、维修仪器后重新校准，这样才能长期保证数据可靠。
荧光定量PCR校准并不复杂：准备标准品→检查仪器→做标准曲线→验证结果→记录复校。只要按流程坚持做，就能让实验结果更稳定、可比，新手也能轻松上手，为科研或检测提供可信的数据基础。
更新时间：2025-12-19
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