流式细胞仪在免疫表型分析、细胞周期检测、稀有细胞鉴定等领域应用广泛，但其结果的准确性高度依赖校准状态。一次规范的流式细胞仪校准，不仅能消除仪器漂移，还能保证不同批次、不同操作人员之间的数据可比。本文以常见的多色检测为例，介绍从开机自检到补偿调整的完整实操流程，新手也能按步骤完成。
一、开机与自检
开机后先运行仪器自带的自检程序，检查激光功率、液流系统、光电倍增管(PMT)响应及管路密封性。多数仪器会在自检报告中给出各通道的信号强度与背景噪声值，需确认它们在厂商规定的正常范围。若近期有移动或维修，建议先做液流速率校准，确保细胞通过检测区的速度与标称值一致。
二、荧光通道灵敏度校准
使用厂家配套的单色校准微球(如Spherotech Rainbow Calibration Beads)，分别在各荧光通道采集信号，调整PMT电压，使同一微球在不同通道的中位荧光强度(MFI)落在推荐范围，并保证背景噪声较低。此步骤可消除通道间的灵敏度差异，为后续多色分析打好基础。
三、通道间补偿校准
多色检测时，不同荧光染料的发射光谱会互相重叠，必须通过补偿消除串色。常用方法是使用单染对照样本(只标记一种荧光染料)，在相应通道采集数据并生成补偿矩阵。操作时需注意：
单染样本浓度与染色条件应与实验样本一致；
采集足够的事件数(一般≥5000)，保证统计可靠；
在软件中输入补偿值或通过向导自动计算，保存并验证矩阵有效性。
四、标准微球定量校准(可选)
若需绝对计数，可使用已知浓度的校准微球，在设门分析后反推细胞浓度，并据此调整流速或软件换算系数，确保定量结果准确。
五、记录与复校
将校准日期、环境条件、微球批号、PMT电压、补偿矩阵等参数完整记录。建议每1–3个月或在更换激光器滤片、维修液路后重新校准，遇到数据异常(如分群偏移、背景升高)应及时排查并复校。
从开机自检到补偿调整，流式细胞仪校准并不复杂，关键在于按规程操作并坚持记录。规范的校准能让仪器始终保持较佳状态，为免疫学研究与临床诊断提供稳定、可靠的数据支撑。
更新时间：2025-12-22
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