Oxoid 李斯特菌增菌肉汤

Oxoid 李斯特菌增菌肉汤

李斯特氏菌属（Listeria ）普遍存在于环境中，其中单核细胞增生李斯特氏菌是人类致病菌。李斯特菌经常在即食食品、热狗、熟食、未消 毒的乳制品、冰淇淋、蔬菜、发酵腊肠、生肉、家禽等食品中风险较大。在干燥，25%盐浓度，冷藏，冷冻和热处理的情况下能存活。

Oxoid提供各种李斯特菌增菌肉汤、选择性培养基、显色培养基：

缓冲李斯特菌增菌肉汤（BLEB）Buffered Listeria Enrichment Broth(BLEB)用于检测单增李斯特菌的选择性增菌培养基，适用于环境样品和发酵产品，CM0897加添加剂SR0141E或SR0213E：

缓冲李斯特菌增菌肉汤 CM0897：

配方表：

*可根据标准需要自行调整

李斯特菌选择性增菌添加剂 SR0141E：

改良李斯特菌选择性增菌添加剂 SR0213E：

使用方法：

将23.5g的CM0897加入到500ml无菌水中，混匀以溶解。将1瓶SR0141E或SR0213E按照说明书溶解，加入上述培养基中。121℃灭菌15分钟。冷却到50℃，混匀倒平板。

技术要点：

1、将25g或25ml样品加入225ml缓冲李斯特菌增菌肉汤中，如果需要的话就混匀；

2、经过24和48小时培养后，将缓冲李斯特菌增菌肉汤中的微生物转移到李斯特菌琼脂平板上：（1）直接倒注在平板上（2）将1ml的BLEB加入9ml的0.5的KOH中，混匀，涂布在平板上。

注意，合适的再培养基的琼脂有：Oxford李斯特菌选择性培养基，CM0856加SR0140E；PALCAM培养基，CM0877B加SR0150E。

质控：

阳性对照 Listeria monocytogenes ATCC® 19117   浑浊生长

阴性对照 Enterococcus faecalis ATCC® 29212    抑制

李斯特菌选择性增菌培养基  (Listeria Selective Enrichment Medium)

符合FDA配方的李斯特菌增菌培养基，被推荐用于从食品中选择性增菌李斯特菌

CM0862B加添加剂（SR0141E，SR0213E或SR0149A三选一）：

李斯特菌增菌肉汤 CM0862：

*可根据标准需要自行调整配方

改良李斯特菌选择性增菌添加剂 SR0149A，每小瓶配2.25L培养基：

产品描述：

Oxoid 李斯特菌增菌肉汤CM0862的配方是由Lovett发表的配方而来，被推荐用于从食品中选择性增菌李斯特菌，这种增菌方法可以使生牛奶中低于10 cfu/ml的李斯特菌复苏。

为了获得更高的提取率，将培养1天，2天，7天后的增菌肉汤接种到琼脂培养基上，Agello的文献中显示，7天增菌培养后，牛奶和奶制品中的受环境限制的李斯特菌可以获得更好的复苏率。

技术要点同上文

质控：

阳性对照 Listeria monocytogenes ATCC® 7644     浑浊生长

阴性对照 Enterococcus faecalis ATCC® 29212    抑制

Fraser肉汤 (Fraser Broth)

用于从食品和环境样本中分离李斯特菌的二次选择性诊断增菌肉汤，CM0895加添加剂SR0156E：

Half Fraser肉汤 (Half Fraser Broth)

李斯特菌的选择性初增肉汤，CM0895加添加剂SR0166：

Fraser肉汤基础 CM0895

配方表

 *可跟进标准需要自行调整配方，pH不随添加剂的加入而改变      

Fraser添加剂 SR0156E，每小瓶配500ml培养基：

将28.7g的CM0895加入500ml无菌水中，混匀溶解，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃后加入已按照说明书溶解好的1瓶SR0156E，混匀后倒平板。

Half Fraser添加剂 SR0166：

将12.9g的CM0895加225ml无菌水中，混匀溶解，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃后加入已按照说明书溶解好的1瓶SR0166E，混匀后倒平板。或者用129.0g的CM0895配1瓶SR0166G。

产品描述：

Fraser肉汤是对UVM二次增菌肉汤（USDA-FSIS 标准）的改进版，它含有柠檬酸铁铵和氯化锂，会使培养基变黑。培养基变黑是有李斯特菌生长的证据。所有的Fraser增菌产物都要经过琼脂平板再次培养。

Fraser肉汤对于检测环境和食品样品中的李斯特菌非常准确，而使用UVM肉汤检测肉类中的李斯特菌。

Half Fraser肉汤是对Fraser肉汤的改良版，它将奈啶酸和盐酸吖啶黄的含量减半，在ISO的李斯特菌检测方法中用来作为初步增菌肉汤。

Half Fraser肉汤（不含柠檬酸铁铵） CM1053

：

*可根据标准需要自行调整

UVM李斯特菌选择性增菌培养基  Listeria Selective Enrichment Media (UVM Formulations)

两步骤、选择性增菌方法（USDA-FSIS方法）,CM0863B加添加剂SR0142或SR0143，对于肉类中的李斯特菌检出率高。

UVM 李斯特菌增菌肉汤基础 CM0863：

*可根据标准需要调整配方

SR0142E UVM初增肉汤，每小瓶配500ml培养基

SR0143E UVM二次增菌肉汤，每小瓶配500ml培养基

李斯特菌ONE肉汤 (ONE Broth-Listeria)

从食品和环境样本中对李斯特菌选择性增菌。是Oxoid 李斯特菌快速培养检测方法中的选择性增菌肉汤。

李斯特菌ONE肉汤可以在24小时内对食品样品中的李斯特菌进行增菌，非常适合肉类中检测李斯特菌。也是 Oxoid Listeria Precis™快速检测方法中的增菌方法

李斯特菌ONE肉汤基础 CM1066：

SR0234的配方厂家未有公开。

Oxford 李斯特菌选择性琼脂 Listeria Selective Agar (Oxford Formulation)

用于检测李斯特菌的选择性诊断培养基，经过李斯特菌选择性增菌培养后，使用CM0856加添加剂SR0140或SR0206进行再培养：

Oxford 李斯特菌选择性琼脂基础 CM0856：

配方表

*可根据标准需要调整配方

SR0140E，每小瓶配500ml培养基：

SR0206E，每小瓶配500ml培养基：

PALCAM琼脂 (PALCAM Agar)

用于检测李斯特菌属的选择性和诊断培养基，CM0877加添加剂SR0150：

PALCAM琼脂基础 CM0877：

*可根据标准需要调整配方

PALCAM选择性添加剂 SR0150：

使用方法：

每500ml无菌水配34.5g的CM0877干粉，*溶解后121℃灭菌15分钟，冷却到50℃，加入已经按照说明书溶解的1瓶SR0140E，混匀倒平板。

如果给培养基加入卵黄乳液（比如SR0047），可以使培养基增加受损李斯特菌的恢复率。

产品描述：

PALCAM培养基由于添加了氯化锂，头孢他啶，多粘菌素B，盐酸吖啶黄，因此具有更高的选择性， 它通过双重鉴别指标使单增李斯特菌更容易被鉴别和诊断出来。

技术要点：

1、在增菌肉汤培养的基础上再转移到琼脂上培养，将1接种环的选择性增菌肉汤接种到PALCAM琼脂上；

2、在微需氧条件下，37℃培养48小时；

3、48小时候检查李斯特菌的典型菌落：2mm直径， 褐绿色菌落，具有黑色凹陷中心，在樱桃红色培养基背景下有一圈黑色外环。

Brilliance李斯特菌显色琼脂 (Brilliance Listeria Agar)

选择性分离和鉴别单增李斯特菌和李斯特属，作为分离培养基用于Oxoid李斯特菌Precis方法中。使用CM1080加添加剂SR0227E和SR0228E。

使用方法：

称取33.6g的CM1080到480ml无菌水中，混匀，121℃灭菌15分钟，冷却到46℃，分别加入已经按照说明书溶解好的SR0227E和SR0228E各1小瓶。混匀，倒平板。

Brilliance李斯特菌显色琼脂基础 CM1080：

配方表：

*可根据标准需要自行调整配方

Brilliance李斯特菌显色选择性添加剂 SR0227E：

Brilliance李斯特菌显色鉴别添加剂 SR0228E：

产品描述：

单增李斯特菌是最常见的致病性李斯特菌，而且已经表现在对人和动物的致病性上。有一些伊凡诺夫李斯特菌Listeria ivanovii 也有磷脂酶活性， 虽然伊凡诺夫李斯特菌是对动物的主要病原菌，但是也有一些菌株也表现出对人的感染能力。实验证明这款培养基比PALCAM和Oxford培养基对于分离单增李斯特菌更好。

Brilliance李斯特菌显色琼脂中的X-葡萄糖苷显色剂对李斯特菌属进行初步鉴定，这种显色剂可由β-葡萄糖苷酶裂解，这种酶在李斯特菌属里面常见，其他具有这种酶的微生物被培养基中的其他成分抑制，比如肠球菌被氯化锂，多粘菌素B和奈啶酸抑制，两性霉素抑制样品中的霉菌酵母。单增李斯特菌和伊凡诺夫李斯特菌可以产生磷脂酶，可以水解卵磷脂，在菌落外围产生不透明的白色环，因此被进一步鉴别出来。

质控：

阳性对照：Listeria monocytogenes ATCC®7644   生长良好，绿色/蓝色菌落带有外环

Listeria innocua ATCC®33090        生长良好，绿色/蓝色菌落没有外环

阴性对照：Enterococcus feacalis ATCC®29212   抑制

李斯特菌显色琼脂（ISO） Chromogenic Listeria Agar (ISO)

简称OCLA琼脂，用于李斯特菌和单增李斯特菌的选择性显色培养基，符合ISO推荐配方（ISO 11290-1:1997 ）

李斯特菌显色琼脂基础（ISO） CM1084：

配方表

*可根据标准需要自行调整

OCLA (ISO) SELECTIVE SUPPLEMENT SR0226E：

OCLA (ISO) DIFFERENTIAL SUPPLEMENT SR0244E:

使用方法：

改良ISO配方： 称取34.5g的CM1084溶解于480ml无菌水中，混匀，121℃灭菌15分钟，冷却到46℃，添加按照说明书溶解好的1小瓶SR0226E，再添加1小瓶SR0228E，混匀倒平板。

ISO配方：称取34.5g的CM1084溶解于480ml无菌水中，混匀，121℃灭菌15分钟，冷却到50℃，添加按照说明书溶解好的1小瓶SR0226E，再添加1小瓶SR0244E，混匀倒平板。

技术要点：

李斯特菌显色琼脂（ISO）可以用在多个标准的增菌方法之后，比如ISO，NMKL，FDA，NFNOR(UNI 03/04-04/05)等。

以下方法是对ISO 11290-1:1997 方法的总结：

1、添加25g食品样品到225ml的Half Fraser Broth CM0895 & SR0166，混匀至少30秒；

2、将上述培养基在30℃培养24±3小时，不要震荡培养；

3、使用接种环接种到李斯特菌显色琼脂以及二次选择性培养基（比如PALCAM CM0877&SR0150）中。37℃培养24±3小时（PALCAM琼脂应该在微需氧条件下培养才能获得最好结果）；

4、检查PALCAM琼脂上的黑色菌落，或者李斯特菌显色琼脂上的没有外环的蓝色菌落；

5、将同样的0.1ml的Half Fraser Broth接种到10ml的Fraser Broth CM0895 & SR0156中，37℃培养48±3小时，然后重复第3、4步，接下来做第6步；

6、参考ISO 11290-1:1997 使用正确的方法确认平板上的可疑菌落为单增李斯特菌或李斯特菌属。